期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化
杨凡；杜佳慧；吴洁；袁濮玉；苏倩；撖荣；邱桥成；薛胜利；刘松柏；孙中文
关键词：FMS样的酪氨酸激酶3, 突变体, 蛋白纯化, FMS样的酪氨酸激酶3-内部串联重复
摘要：目的 构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化.方法 从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上.重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJet转染到HEK293T细胞进行表达.使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白.然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色.结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化.结论 在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白.
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