期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人八聚体结合蛋白4(Oct4)cDNA的克隆及其在大肠杆菌和HEK293T细胞的表达
阮碧波；符吴萸；芮雯；陈海璇；周朋君；廖双叶；吴小清；王一飞；陈宏远
关键词：OCT4基因, 分子克隆, 原核表达, 真核表达
摘要：目的 克隆人八聚体结合蛋白4 (Oct4) cDNA,研究其在原核及真核系统中的表达.方法 提取人宫颈癌HeLa细胞中的总RNA,经反转录PCR获得cDNA,PCR扩增Oct4 cDNA并将其分别克隆入表达载体pET-22b(+)原核质粒和pcDNATM3.1(+)真核质粒,构建含该序列的重组原核表达载体pET42b(+)-Oct4和真核表达载体pcDNA3.1(+)-his-Oct4.然后分别进行双酶切和测序鉴定.前者在E.coli BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白,后者以脂质体介导法转染至HEK293T细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测细菌和细胞中OCT4蛋白的表达水平.结果 PCR扩增得到约1100 bp目的DNA片段;重组表达质粒pET-22b(+)-Oct4和pcDNA3.1(+)-his-Oct4经双酶切鉴定和测序分析证明载体构建成功;pET-22b(+)-Oct4经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后SDS-PAGE分析表明,目的蛋白在宿主E.coli BL21(DE3)中高效表达OCT4融合蛋白,相对分子质量(Mr)约38 000,与其理论M基本相符;pcDNA3.1(+)-his-Oct4转染HEK293T细胞经Western blot法检测,证实导入的Oct4成功表达.结论 在大肠杆菌和HEK293T细胞成功表达OCT4蛋白.
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