期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
miR-9和miR-124共表达载体的构建与靶分子鉴定
薛茜；王琰；张坤；赵湘辉；田婉莹；杨安钢；鞠躬；王键
关键词：miRNA, 共表达载体, 脊髓损伤
摘要：目的 构建miR-9和miR-124单独表达和串联共表达的真核表达载体,并鉴定其共同靶分子.方法 将pri-miR-9和pri-miR-124的编码序列分别插入或串联后插入真核表达载体pCAG,转染HeLa细胞后,实时定量PCR鉴定成熟miRNA的表达水平.构建miR-9和miR-124分子完全互补的靶基因萤光素酶报告载体,双萤光素酶报告系统检测表达的成熟miRNA的生物学功能.利用生物信息学软件预测miR-9和miR-124的共同靶分子,将靶分子mRNA的3 '非翻译区(UTR)克隆入pGL3luciferase报告基因载体中,观察转染细胞后miRNA对报告基因表达的影响.结果 经测序及酶切鉴定证实3种miRNA表达载体构建完全正确,实时定量PCR检测表明这3种表达载体均能正确高表达成熟的miRNA.双萤光素酶报告系统检测证实3种载体表达的miRNA分子具有生物学活性.生物学软件预测发现小分子GTP结合蛋白Ras相关蛋白2a(Rap2a)是miR-9和miR-124的靶基因,成功构建了含有Rap2a 3'UTR的萤光素酶报告基因载体.双萤光素酶报告系统提示miR-9和miR-124均能抑制Rap2a的表达.结论 成功构建了miR-9和miR-124的单独表达和共表达载体,并能高表达具有生物学活性的成熟的miR-9和miR-124分子.Rap2a可能是miR-9和miR-124的一个共同靶分子.
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