期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立
韩翠翠；岳丽玲；杨莹；简白羽；马立威；刘吉成
关键词：TOX高迁移率蛋白家族成员3, 慢病毒表达载体, MDA-MB-231细胞
摘要：目的 构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系.方法 通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增.将TOX3基因克隆到pLVEF-1 a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1 a/GFP-Puro-TOX3慢病毒载体.经酶切和测序鉴定后,将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和病毒滴度检测.用获得的慢病毒液转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过嘌呤霉素选择性培养,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞中TOX3 mRNA的表达,Western blot法检测MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达.结果 经酶切和测序鉴定,成功构建了pLVEF-1a/GFP-Puro和pLVEF-1 a/GFP-Puro-TOX3慢病毒表达载体,病毒包装后检测病毒滴度分别为2×108 TU/mL和1×108 TU/mL,转染MDA-MB-231细胞后,GFP表达的细胞达95％以上.与阴性对照组相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,MDA-MB-231-TOx3细胞中TOX3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高.结论 成功构建了TOX3慢病毒表达载体并建立了稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞系.
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