期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人GPC3基因真核表达载体的构建及重组蛋白表达纯化
宋海晶；张卓梅；邱伟成；杨小盼；万德友；何椿鹏；李萌萌；高新
关键词：人磷脂酰肌醇蛋白3, 克隆, 毕赤酵母, 表达, 纯化, 肝癌
摘要：目的:人磷脂酰肌醇蛋白3是肝癌的诊断标志物和潜在治疗靶点.本研究目的在于获得足量的GPC3蛋白用于结构、功能及应用研究.方法:通过RT-PCR从人胎肝中克隆GPC3编码cDNA,利用XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点,将GPC3ORF编码基因插入毕赤酵母表达载体pPICZ A中,构建真核表达质粒pPICZ A-GPC3.以该表达质粒转染毕赤酵母菌株GS115,在含有Zeocin的YPD平板上进行筛选.然后使用HRP标记的山羊抗人IgG在醋酸-硝酸纤维素双层膜上进行Dot blot筛选.对筛选获得的菌株进行诱导表达,表达上清经SDS-PAGE和Western blot检测.结果:筛选获得的阳性菌株诱导表达上清SDS-PAGE结果表明在预期位置观察到GPC3重组蛋白条带,且该蛋白条带与抗GPC3单克隆抗体(mAb)孵育后呈现特异性反应.工程菌株经高密度培养后,发酵上清中重组GPC3表达量约5 mg/L,进而通过阳离子交换层析从发酵上清中纯化了重组蛋白.结论:利用毕赤酵母表达并纯化了重组人GPC3蛋白,为进一步研究GPC3的结构和功能奠定了基础.
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