期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
用于研究人凝血因子Ⅷ重链抗原表位的双色荧光免疫印迹分析法
张璇；果光伟；李大伟
关键词：人凝血因子Ⅷ重链, 双色荧光免疫印迹, 抗原表位, 双色红外激光成像系统
摘要：目的:寻找更简便精确的方法来检测人凝血因子Ⅷ的抗原表位.方法:采用PCR技术从人凝血因子Ⅷ的克隆载体pENTR223.1/FVⅢ上克隆出FⅧ重链(FⅧ-N)的cDNA.将cDNA插入原核载体pET21a构建重组表达载体pET21 a-FⅧ-N,并转化大肠杆菌BL21( DE3),以IPTG诱导表达His-FⅧ-N融合蛋白.以表达产物免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗FVⅢ-N的抗血清.接着在重组表达载体pET21 a-FⅧ-N中引入内参Flagotag.对FⅧ-N进行定点突变,构建两个突变克隆N1和N2,对二者以及原FⅧ-N进行双色荧光免疫印迹分析.用双色红外激光成像系统进行扫描和定量分析,以绿荧光与红荧光的光密度比值表示突变克隆抗原性的大小.结果:双色荧光免疫印迹分析表明,突变克隆N1,N2的抗原性与原FⅧ-N相比均有显著下降(P＜0.05).FⅧ A2区的三个氨基酸残基Arg484,Arg489,Arg593对FⅧ-N 抗原性起着重要的作用.结论:成功建立了人凝血因子Ⅷ重链抗原表位检测的双色荧光免疫印迹分析法.
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