期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
含APPβ裂解位点肽及Aβ1-15的嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备及其免疫原性分析
冯改丰；王军阳；靳辉；王唯析；钱亦华；杨维娜；王全颖；杨广笑
关键词：β-淀粉样肽(Aβ), HBcAg, 融合蛋白, 病毒样颗粒, 基因工程疫苗
摘要：目的:构建含APPβ位点裂解肽ABCSP、β-淀粉样肽氨基段15肽(Aβ1-15)及删除了c/e1表位的截短型HBcAg基因的原核表达质粒pET/c-ABCSP-Aβ15-c,并在大肠杆菌中表达,观察融合蛋白C-ABCSP-Aβ15-c形成的病毒样颗粒,检测其免疫原性,为多表位AD基因工程疫苗的研究奠定基础.方法:PCR扩增含APPβ位点裂解肽ABCSP、β-淀粉样肽氨基段15肽(Aβ1-15)的基因,连接于HBcAg的1～71的3’端,再将HBcAg的88～144位氨基酸的基因片断连接于Aβ1-15的基因的3’端,构建重组质粒pUC/c-ABCSP-Aβ15-c,将重组基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pET/c-ABCSP-Aβ15-c,IPTG诱导表达.用SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色,观察重组基因的表达.透射电镜观察融合蛋白形成的病毒样颗粒.融合蛋白经腹腔注射免疫昆明小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗-ABCSP、抗-Aβ抗体的滴度.结果:经酶切鉴定、DNA序列测定证实,重组基因位于表达质粒之中,其大小、序列与理论设计相符.诱导表达后,SDS-PAGE显示,在细菌裂解液的上清和沉淀中均可见到表达蛋白条带,且以沉淀中为多,约占沉淀总蛋白的40％.纯化后的融合蛋白形成电镜下可观察到的病毒样颗粒.昆明小鼠经融合蛋白免疫5次后,其血清中抗-ABCSP抗体的滴度可达1∶5 000,抗-Aβ抗体的滴度可达1∶10 000,检测不到抗-HBc抗体.结论:c-ABCSP-Aβ15-c融合基因在大肠杆菌中可高效表达,表达的融合蛋白具有较强的免疫原性.
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