期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
稳定表达水通道蛋白-4 HEK293细胞株的建立及应用
赵忙所；孙朝晖；耿同超
关键词：AQP4, HEK293细胞, 间接免疫荧光法, 视神经脊髓炎
摘要：目的:建立稳定表达水通道蛋白-4(AQP4)的HEK293细胞株,并以其检测12例视神经脊髓炎患者血清中是否存在AQP4抗体.方法:从颢叶癫痫患者脑组织提取总RNA,RT-PCR扩增AQP4的cDNA,构建AQP4-绿色荧光蛋白(GFP)融合表达重组体pEGFP-N1-AQP4,转染HEK293细胞,抗生素筛选联合流式细胞仪分选筛选稳定表达细胞株,RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定AQP4的表达,激光共聚焦显微镜观察AQP4在细胞中的定位,并以已建立的细胞为底物间接免疫荧光法检测12例视神经脊髓炎患者血清中是否存在AQP4抗体.结果:经PCR、双酶切、测序鉴定证实成功获取AQP4的cDNA,AQP4-GFP融合表达重组质粒pEGFP-N1-AQP4构建成功,抗生素筛选联合流式细胞仪分选筛选稳定表达细胞株,稳定表达率达90%以上,RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定存在AQP4的表达,激光共聚焦显微镜进一步确认AQP4-GFP融合蛋白主要表达于细胞膜上,11例典型视神经脊髓炎患者血清中检出AQP4抗体,对视神经脊髓炎诊断敏感性为91.7%,特异性为94.7%.结论:成功建立稳定表达AQP4的HEK293细胞株,以其作为检测底物检出视神经脊髓炎患者血清中存在AQP4自身抗体.
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