期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
往期目录
-
2000
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
重组人IL-12在CHO细胞中高效表达克隆的筛选及产物的生物学活性分析
吕锐；张文卿；于红；李丹
关键词：白细胞介素-12, 中国仓鼠卵巢细胞, 基因表达
摘要：目的:重组人白细胞介素-12(rhIL-12)真核表达质粒(pcDNA6/v5-his-pT0)转染CHO细胞,筛选高效稳定表达克隆;并对表达产物进行生物学活性分析.方法:采用聚乙烯亚胺(PEI)将pcDNA6/v5-his-p70转入CHO细胞;用杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选阳性表达克隆,并进行单克隆扩增;RT-PCR进行表达鉴定;ELISA检测各克隆rhIL-12的表达量;应用淋巴细胞增生实验及细胞内细胞因子染色方法分析rhIL-12的生物学活性.同时,对筛选出的阳性克隆进行表达稳定性观察.结果:RT-PCR结果显示,选取的20个阳性克隆均可扩增出1 800 bp的特异性片段;ELISA表明,其中6个克隆rhIL-12表达水平较高(312.69～719.10 ng/L),高表达量达到719 ng/L(5×104个细胞,48 h);生物学活性分析表明,表达的rhIL-12可明显提高献血员外周血PBMC对PHA/HCMV反应的C34/IFN-γ及CD8/IFN-γ双标记阳性细胞克隆的频数;并且,可明显提高献血员外周血PBMC对PHA/HCMV刺激的增生反应效能.阳性克隆在维持量的筛选药物(2 ng/LBlasticidin)压力下传代6个月,其表达水平无明显变化.结论:rhIL-12真核表达载体(pcDNA6/v5-his-p70)能在CHO细胞中高效稳定表达;其表达产物具有良好的生物学活性.
友情链接