期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
武正华；唐晓波；王志刚；纪宏宇；于磊；刘慧文；朱大岭
关键词：人羧酸酯酶-Ⅱ, 单克隆抗体, 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
摘要：目的:制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(human carboxylesterases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定.方法:以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb.用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位.用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原.结果:获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系.杂交瘤细胞分泌的mAb Ig的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7.Western blot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带.免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合.该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符.对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ.结论:制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具.
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