期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
丙型肝炎病毒F蛋白的原核表达及初步应用
蒋春梅；刁振宇；崔国兴；钱万红；邓小昭；许可；丁伟良；谈永飞；张云
关键词：丙型肝炎病毒, F蛋白, 基因克隆, 蛋白表达, 抗体制备
摘要：目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)F基因的原核表达载体,并在大肠杆菌TG1中进行表达,用以检测丙肝患者体内抗体,并制备抗血清.方法:提取患者血清中的HCV RNA,并进行基因分型.取鉴定为HCV 1b型的病毒,用RT-PCR扩增HCV F蛋白基因的序列.将扩增产物插入pGEM-T载体中,测序正确后,用EcoR I、BamH I双酶切后,再插入表达载体 pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌TG1,在IPTG诱导下表达GST-F蛋白.用亲和层析法纯化GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清.并用纯化的GST-F蛋白进行ELISA法检测丙肝患者血清抗F蛋白抗体.结果:在细菌裂解液中检测到重组的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B 亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-F 融合蛋白.应用Western blot方法检测证实,用纯化的GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠得到了特异性的抗体.用纯化的GST-F蛋白进行ELISA检测120例丙肝患者血清抗F蛋白抗体,82例呈阳性.结论:通过上述方法制备的融合蛋白纯度较高,免疫小鼠获得的抗体具有良好的特异性.用纯化的目的蛋白检测丙肝患者血清抗F蛋白的抗体的阳性率为68%,与国外的报道接近,说明在HCV感染的自然病程中有F蛋白的产生,为研究HCV F蛋白及与HCV相关疾病的诊断和治疗提供了条件.
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