期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
抗人CD25分子单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定
沈弢；张爱华；闭兰；史良如
关键词：CD25, ScFv, 蛋白表达, ELISA
摘要：目的:构建和表达抗人CD25分子单链抗体(scFv)蛋白, 并测定其生物学活性.方法:用RT-PCR方法从能分泌特异性抗CD25单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因.用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起, 构建抗CD25分子scFv的基因.将scFv基因克隆至pMD18T, 用限制性内切酶切以及测序鉴定.将scFv 基因连接到pBAD/gⅢA表达载体, 转化Top10表达菌.阳性克隆用左旋阿拉伯糖诱导4 h, SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度, 竞争抑制ELISA实验检测其活性.结果:scFv基因长度约为700 bp.通过DNA序列测定和分析, 构建出VL-(GGGGS)3-VH(但其中349位G突变为A, 使Linker其中一位Gly→Ser).其VH隶属于小鼠Ig重链可变区Ⅲ(C)亚类, 全长351 bp, 可编码117个氨基酸; 其VL隶属于小鼠Igκ轻链可变区Ⅳ亚类, 全长318 bp, 可编码106个氨基酸.TOP10中表达的scFv抗体加上同时融合表达的两个标签6×His和C-myc Mr约为31 000, 结果符合scFv的Mr.竞争抑制细胞ELISA实验显示表达的scFv具有活性.结论:此scFv基因的表达产物具有一定的特异结合活性.为抗CD25 scFv的临床应用打下了基础.
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