期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人核糖体蛋白S13的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
郭雪艳；时永全；翟惠虹；孙力；刘理礼；韩霜；雷婷；樊代明
关键词：核糖体蛋白S13, 原核表达, 融合蛋白, 纯化, 多克隆抗体
摘要：目的:克隆人核糖体蛋白S13(ribosomal protein S13, RPS13)cDNA全长, 构建原核表达质粒, 诱导表达、纯化RPS13蛋白并制备其多克隆抗体.方法:应用RT-PCR方法从胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增出RPS13的cDNA全长, 利用DNA重组技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-RPS13, 双酶切及测序鉴定.将重组载体转化入大肠杆菌BL21中, 筛选抗性克隆并经DNA测序证实.IPTG诱导融合蛋白的表达, 利用镍离子亲和层析柱提纯融合蛋白, 经SDS-PAGE和Western blot鉴定.用纯化的融合蛋白His-RPS13免疫BALB/c小鼠, ELISA法测定抗体效价, 饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体, Western blot检测抗体活性.结果:RT-PCR扩增片段与预计目的基因片段大小一致;双酶切鉴定表明,重组表达载体pET-28a(+)-RPS13构建成功, DNA测序结果显示所获基因序列与GenBank中收录完全相同.IPTG诱导3 h后, 经SDS-PAGE检测显示在Mr 19 000处出现一新生条带, 与预计的融合白大小一致;利用抗His标签的抗体进行Western blot, 结果证实融合蛋白表达成功.其免疫血清经Western blot证实可特异性的识别蛋白RPS13.结论:成功地获得了RPS13的编码基因序列, 并获得了纯化的RPS13蛋白质, 为制备RPS13的单克隆抗体、进一步研究RPS13在肿瘤中的作用奠定了基础.
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