期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
PTN shRNA腺病毒载体的构建及其对大鼠DRGn神经突起的影响
姚俊；马清涌；王连才；张珉；申素刚
关键词：重组腺病毒, 神经轴突过度生长因子, PTN, 短发夹RNA, 胰腺癌细胞
摘要：目的:构建特异性shRNA腺病毒载体,使之干扰神经轴突过度生长因子(PTN)在胰腺癌细胞中的表达,探讨其对SD大鼠背根神经节神经元(DRGn)神经轴突的影响.方法:设计并合成4对靶向PTN单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后经脂质体介导转染胰腺癌细胞,通过RT-PCR方法筛选对PTN沉默效果佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒进行同源重组,筛选出正确重组子,用HEK293A细胞包装出表达shRNA-PTN的重组腺病毒并测定其病毒滴度,通过Western blot方法对腺病毒沉默PTN效果予以检测.shRNA-PTN腺病毒构建成功后感染胰腺癌PC-2细胞,然后和DRGn共培养,观察DRGn生长分化和形态特征.结果:测序结果提示所构建的pENTR/U6-shRNA质粒正确,并从4对ds oligos筛选出对PTN沉默效果佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,经同源重组后成功构建了介导shRNA-PTN复制缺陷型重组腺病毒.转染胰腺癌细胞后,Western blot检测显示shRNA-PTN腺病毒感染胰腺癌细胞后对PTN蛋白的沉默效果7 d后达佳效果.感染shRNA-PTN腺病毒的胰腺癌PC-2细胞和DRGn共培养,DRGn神经轴突的生长和延长受抑制,以第7天为明显.结论:成功地构建介导shRNA-PTN复制缺陷型重组腺病毒;感染shRNA-PTN腺病毒的胰腺癌PC-2细胞和SD鼠DRGn共培养可以抑制DRGn神经轴突的生长.
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