期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人源性抗HBsAg单链Fab基因在Pichia pastoris中的表达
邓宁；向军俭；粟宽源；王宏；唐勇
关键词：HBsAg, 单链Fab, 毕赤酵母
摘要：目的:研究重组Fab的结构与亲和活性的关系.方法:通过重叠PCR,将人源性抗HBsAg Fab的H和L链基因融合构建单链Fab基因,并将其转入毕赤酵母表达载体pPICZαA中.以单链Fab基因表达载体通过氯化锂转化法转化毕赤酵母GS115.将获得的重组酵母在摇瓶中培养进行重组单链Fab的可溶性表达.表达上清经硫酸铵沉淀及亲和层析纯化后,用直接ELISA检测表达产物和纯化Fab的活性.结果:SDS-PAGE和Western blot分析显示,单链Fab在毕赤酵母中获得分泌型表达.薄层扫描显示,在摇瓶中培养毕赤酵母表达的单链Fab约为5～10 mg/L.经亲和层析纯化获得纯度达97.8%的重组单链Fab.经直接ELISA测定的结果显示,重组单链Fab具有较好的结合HBsAg的活性.结论:通过重叠PCR构建的融合单链Fab基因,可成功地在毕赤酵母中获得分泌型表达,表达产物具有较好的结合HBsAg的活性.
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