期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响
周立华；薛斌；郭仕英；史一欢；温传俊；李朝军
关键词：hNRAGE, 腺病毒载体, 同源重组, 细胞周期
摘要：目的:构建hNRAGE基因的重组腺病毒载体,并研究其对293细胞细胞周期的影响.方法:采用PCR方法扩增hNRAGE基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdTrack-CMV/hNRAGE.经测序检测后,用Pme I酶切使pAdTrack-CMV/hNRAGE被线性化,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组.经Pac I酶切鉴定后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-hNRAGE颗粒.利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生,测定病毒颗粒的浓度.用Western blot检测目的基因的表达.采用MTT法检测293细胞的活力,用流式细胞术分析hNRAGE基因对293细胞周期的影响.结果:成功地构建hNRAGE重组腺病毒载体.Western blot检测结果证实,hNRAGE基因可在293细胞中表达.收获病毒后,经测定病毒颗粒的浓度大约为6.5×109个/μL.转染了重组腺病毒Ad-hNRAGE的293细胞与正常细胞相比较,增殖率显著降低,G0-G1和G2-M期的细胞增多,S期的细胞明显减少.结论:hNRAGE基因可能有抑制293细胞生长的作用.
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