期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-精浆蛋白抗体轻链
张青；张思河；易静；苏明权；包国强；郝晓柯
关键词：噬菌体抗体库, 导向筛选, 前列腺癌
摘要：目的: 以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板, 筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链.方法: 利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因, 克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中, 电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库.通过稀释滴定、限制性酶切和随机测序, 对所建杂合库的库容、重组率和多样性分别进行鉴定, 以M13K07辅助噬菌体超感染, 利用亲和纯化的γ-sm为抗原, 对挽救展示的噬菌体抗体库进行3轮淘筛和克隆鉴定.后对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测.结果: 构建成功1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的杂合人-鼠噬菌体抗体库.利用纯化的γ-sm 3轮亲和淘筛后, 5个克隆成功诱导表达特异性的pIII融合抗体.ELISA进一步检测表明, 5个克隆均呈特异性阳性反应, 其中2个克隆亲和力较高, 测序显示其所含轻链基因序列完全相同, 可变区来源于IGKV4-1*01胚系基因家族.结论: 利用鼠源Fd片段为模板, 导向筛选杂合噬菌体库, 成功筛选到人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链.
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