期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
抗CD20嵌合抗体的构建与表达
王玉刚；黄英；谷欣；于鸣；冯健男；孙瑛勋；黎燕；沈倍奋
关键词：杂交瘤, 质谱分析, 嵌合抗体
摘要：目的:构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达.方法:采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定.还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-28的轻、重链蛋白,切取轻链及重链条带,质谱测定氨基酸序列,Biolynx和pepeseq软件分析可信度.对比所测DNA序列与蛋白序列,确定所钓取基因的正确性.将mAb 1-28轻重链可变区基因,连接至表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体C1-28的轻链真核表达载体C1-28L及重链真核表达载体C1-28H.PCR、酶切及序列测定以确定连入基因的正确性.脂质体介导法将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,RT-PCR检测mRNA水平的表达,夹心ELISA法检测蛋白表达量,Western blot检测目的蛋白的大小.结果:钓取到mAb1-28基因.mAb部分蛋白序列测定结果与根据所钓取基因推出的蛋白序列相对应.成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达,表达量可达257 mg/L,其相对分子质量(Mr)与人IgG的Mr一致.结论:为后续研究嵌合抗CD20抗体对非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一定的依据.
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