期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
重组人sCD40L-IZ基因的克隆、原核表达及重组三聚体蛋白的鉴定
周璇；郁建锋；徐颖；戚春建；黄勇；王泳；张学光
关键词：CD40配体, 异亮氨酸拉链, 表达
摘要：目的: 克隆并表达有生物学活性的CD40配体(CD40 ligand, CD40L)重组蛋白.方法: 应用PCR技术克隆CD40L胞外功能区(E107-L261)基因, 并在其N端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper, IZ)促使其形成三聚体活性形式, 同时为了后期纯化的需要, 在IZ的N端融合6个His, 将所融合得到的sCD40L-IZ克隆进入pET30a表达载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3)表达体系进行诱导表达.结果: 重组蛋白sCD40L-IZ以包涵体形式在大肠杆菌(BL21)中得到较高水平的表达.通过蛋白的变性、复性和HiTrapTM亲和层析获得了纯度达95%以上的sCD40L-IZ重组蛋白.经凝胶过滤层析和非还原SDS-PAGE分析验证了其确有三聚体形式.激光共聚焦实验结果表明, 重组蛋白sCD40L-IZ可与骨髓瘤细胞株XG2表面CD40分子结合, 并促使其在膜表面发生聚集.结论: 人sCD40L-IZ重组蛋白在大肠杆菌体系得以成功表达, 并以三聚体活性形式发挥功能, 为今后进一步研究其与凋亡、疾病发病机制的关系及其在临床治疗中的应用奠定了基础.
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