期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
抗KDR单链抗体的构建、表达及生物学活性鉴定
李容；熊冬生；许元富；邵晓枫；范冬梅；朱祯平；杨纯正
关键词：KDR, 血管内皮生长因子, 单链抗体, 基因表达
摘要：目的: 构建并表达抗人血管内皮生长因子受体KDR单链抗体(scFv)蛋白, 并测定其生物学活性.方法: 设计合成抗KDR单抗(mAb)Ycom1D3 VH、VL引物, 通过重叠延伸拼接(splicing overlap extensive, SOE)PCR, 在VH和VL基因间引入柔性短肽(Gly4Ser)3, 构建抗KDR scFv基因并进行序列分析.将其克隆入pAYZH原核表达载体, 在大肠杆菌中诱导表达, 并以ELISA及免疫荧光结合实验测定重组蛋白的生物学活性.结果: 序列分析表明, 抗KDR scFv基因的全长为729 bp, 编码243个氨基酸.将重组体表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析显示, 融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为30 000, 同预期的结果一致.表达产物主要以不溶性包涵体的形式存在, 表达量占菌体总蛋白的20%.表达产物经变性、纯化及体外复性后, 纯度达90%以上.ELISA和竞争性免疫荧光结合实验显示, 重组小分子scFv可与可溶性KDR抗原及表达KDR受体的人脐静脉内皮细胞特异性结合, 保留了亲本mAb的抗原结合活性.结论: 成功地构建了抗KDR scFv基因, 并在大肠杆菌中功能性表达, 为靶向诊断、 治疗及进一步基因工程改造奠定了基础.
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