期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人心肌肌钙蛋白I的原核表达及其兔抗体的制备
徐霞；杨能；涂洪斌
关键词：肌钙蛋白I, 原核表达, 抗体, 兔
摘要：目的:构建人心肌肌钙蛋白I(hcTnI)基因的原核表达质粒, 在大肠杆菌中表达后, 并制备兔抗hcTnI抗体.方法: 以化学方法合成hcTnI基因并插入融合表达载体pET-21a(+)的多克隆位点, 构建重组表达质粒pET-21a(+)-hcTnI.以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) plysS, 筛选阳性重组子, 经IPTG诱导目的蛋白的表达, 表达产物的免疫学活性用Western blot进行鉴定.以表达的hcTnI蛋白免疫家兔, 制备抗hcTnI的抗体并进行纯化及特性鉴定.结果: 成功地合成hcTnI基因, 测序证实序列正确后亚克隆于表达载体pET-21a(+)中, 经PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆, 序列分析表明其中的插入序列与cTnI基因完全一致.在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)为24 000的目的蛋白, 约占菌体总蛋白的28%, Western blot分析显示, 表达的hcTnI蛋白具有良好的免疫反应性.以纯化的hcTnI免疫家兔后, 能有效地刺激特异性抗体的产生, 抗血清的效价为3×10-4, 且具有良好的特异性.结论: 成功地构建hcTnI基因的原核表达载体pET-21a(+)-hcTnI, 并在大肠杆菌中获得高效表达.制备出兔抗hcTnI的抗体, 且效价及特异性均较良好, 为进一步建立酶联免疫吸附法检测hcTnI奠定了基础.
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