期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
cblN/Zap嵌合分子的构建及其对Jurkat细胞TCRζ的下调
李霞；沈岚；张璟；刘新平；刘云才；药立波
关键词：CBL, 重叠延伸PCR, Jurkat, Jurkat细胞
摘要：目的:构建cblN/Zap嵌合分子, 稳定转染Jurkat细胞后观察对细胞TCRζ的影响.方法: 提取Jurkat细胞的总RNA并反转录为cDNA, 以其作为模板用PCR方法扩增Zap基因的SH2片段.以含有人全长cbl cDNA的质粒pEFHAcbl作为模板扩增cbl基因的N-端(cblN), 并在其N末端带上含24 bp的flag标签.用重叠延伸PCR法, 在cblN基因内部的SH2两端引入BamH I和EcoR V酶切位点并克隆入pcDNA3.1(+)中.再以Zap基因的SH2置换cblN基因的SH2, 即成为pcDNA3.1(+)-cblN/Zap.酶切鉴定及测序正确后, 采用脂质体法稳定转染Jurkat细胞, 用RT-PCR和Western blot鉴定flag-cblN/Zap的表达, 用Western blot检测其对细胞TCRζ表达的影响.结果: 重组质粒pcDNA3.1(+)-flag-cblN/Zap经酶切后可产生与理论预期长度相符的片段.且测序证实其序列正确.脂质体法稳定转染Jurkat细胞后, 检测到目的基因在RNA和蛋白水平的表达.表达的cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ.结论: 重构嵌合分子cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ.
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