期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人CGT52TGT MBL突变体在CHO细胞中的表达及其产物分析
刘凤玲；左大明；白志军；陈政良
关键词：甘露聚糖结合凝集素, CGT52TGT突变体, 表达, 52Cys突变MBL蛋白
摘要：目的:初步探索MBL基因CGT52TGT点突变引起调理吞噬缺损的机制.方法: 采用PCR技术, 从质粒pMBL m52中获取含CGT52TGT点突变的MBL基因, 将其插入真核表达载体pcDNA4/HisMax C中构建重组表达载体.经测序验证后, 电转染入CHO细胞.以800 mg/L Zeocin筛选转染后的CHO细胞30 d; 随后的30 d中, 维持Zeocin的浓度在200 mg/L, 以获取稳定转染的细胞.以RT-PCR分析其mRNA 的表达情况.表达产物经Ni-NTA agarose纯化后, 以非还原SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行初步鉴定.结果: 以PCR扩增的MBLm52基因片段长约750 bp, 将其插入表达载体构建重组真核表达载体pcDNA4/HisMax C-MBLm52, 测序验证序列正确后将其电转染入CHO细胞.从细胞培养上清中获得的纯化的表达产物, 主要为相对分子质量(Mr)约60 000 的分子, 寡聚化程度明显低于重组人野生型MBL和从人血浆中分离的MBL.结论: MBL基因CGT52TGT点突变可能并不影响其表达产物向胞外分泌的过程, 但突变后产生的Cys可能形成新的二硫键, 影响MBL结构单位和/或寡聚分子的形成, 推测该突变MBL蛋白不能发挥正常的功能.
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