期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
采用简并引物克隆葎草花粉过敏原全长同源cDNA
陶爱林；何韶衡；张利达；陈章权；李东栋
关键词：简并引物, 梯度PCR, 基因克隆, 过敏原, 同源基因
摘要：目的:建立一套稳定可靠的方法, 对过敏原性物种中的过敏原同源基因进行快速克隆.方法:在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上, 设计简并引物, 基于高质量葎草花粉RNA, 逆转录合成cDNA.采用Touchdown方式在cDNA池中进行选择性PCR扩增.同时借助梯度PCR程序, 对引物扩增的简并性作进一步强化, 并结合RACE技术获取全长cDNA, 进而对葎草花粉中的过敏原同源基因进行克隆.结果:成功地获得3个全长cDNA克隆.序列分析显示, 这些基因与已知过敏原的基因序列相似性高达79%～85%, 初步认定其为泛过敏原肌球蛋白抑制蛋白(profilin)的同源基因.对比RACE技术获得的相应基因的全长序列发现, 这些序列在引物结合处与简并引物序列之间存在4个碱基的差异, 提示采用Touchdown方式的梯度PCR程序, 可使引物的简并性得到进一步扩展.结论:简并引物与Touchdown梯度PCR相结合的方法, 能够对以葎草为代表的基因组未曾深入研究的物种中的过敏原同源基因进行有效克隆.
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