期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人幽门螺杆菌18 000外膜蛋白与HspA双价疫苗的构建和表达
姜政；黄爱龙；蒲丹；陶小红；王丕龙
关键词：幽门螺杆菌, 热休克蛋白A, 外膜蛋白, 原核表达载体
摘要：目的:构建含人幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)和Mr为18 000的外膜蛋白编码基因的重组载体, 进行核苷酸序列分析, 并在E.coli BL21中表达.方法:用PCR方法从Hp DNA染色体中, 扩增HspA编码基因片段.将目的基因HspA与载体pET32a(+)分别经kpnⅠ和BamH I 双酶切后, 进行连接、测序.同时将重组载体pET32a(+)/HspA和pET32a(+)/Omp18, 分别经Hind III和BamH I 双酶切, 通过凝胶电泳回收pET32a(+)/HspA和Mr 18 000 OMP DNA片段, 经T4连接酶将HspA和Mr 18 000 OMP编码基因通过酶切粘端进行连接, 而后转化并筛选含有两种目的基因的重组载体, 并在大肠杆菌BL21(DE30)中表达.表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后, 以Western blot分析其抗原性.结果:经酶切、测序表明, 插入的基因片段为Hp HspA和Mr为18 000 OMP编码基因, 由891个碱基组成, 与GenBank中登录的序列相比较, 有1.15%的碱基发生变异, 1.26%的氨基酸残基改变.经SDS-PAGE分析发现, 融合基因表达的蛋白Mr为51×103 , 其中pET32a(+)表达的蛋白Mr约为20×103, 可溶性表达产物占菌体总蛋白的18.96%.重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后, 其纯度达95%以上.用Western blot分析显示, 该重组蛋白可被Hp阳性患者的血清及抗Mr为18 000 OMP单克隆抗体所识别, 具有良好的抗原性.结论:成功地克隆并融合表达了Hp HspA和Mr为18 000 OMP, 为Hp疫苗和快速诊断试剂盒的研制奠定了基础.
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