期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
用导向选择链更替技术建立抗肝癌抗原HAb18G的人源性Fab基因库
包国强；马庆久；邢金良；杨向民；陈志南
关键词：抗体基因库, 人源化, 肝癌, pComb3X, 导向选择, 链更替
摘要：目的:在嵌合HAb18-Fab抗体的基础上,利用载体pComb3X,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库.方法:用RT-PCR自肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因.首先,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基因的展示载体pComb3X/CL中,建立人-鼠杂合的Fab基因库,以原核表达的非融合HAb18G的胞外区片段为抗原,筛选杂合的Fab基因,以得到人Fd基因.然后应用筛选出的Fd基因与人L链基因库配对,建立全为人Fab的基因库,并筛选全人Fab基因.将IPTG诱导的表达菌裂解,取其上清对pⅢ-Fab融合蛋白的功能进行分析,并对其编码基因进行测序.结果:建立了库容为2×107的杂合Fab基因库,经6轮筛选后得到7株杂合Fab基因.利用筛选的人Fd基因建立了库容为0.8×107的全人Fab基因库,经4轮筛选得到2株亲和力较高、特异性强的人Fab基因.测序结果显示,2株Fab基因具有相同的Fd基因序列,与亲本抗体同属IgG2亚类;L链基因为κ型,可变区均属于Vκ3家族.结论:利用导向选择链更替技术,筛选出特异性较强、完全人源化的抗肝癌抗原HAb18G的Fab抗体,为进一步的工作打下了基础.
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