期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
人白细胞介素-21 cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达
张胜权；陈兵；罗欣；徐从贞
关键词：白细胞介素-21(IL-21), 克隆, 包涵体, 重折叠, T细胞增殖
摘要：目的:克隆人细胞因子IL-21全长cDNA及其在大肠杆菌中表达,并进一步检测其表达产物的功能.方法:抽取外周血,分离淋巴细胞;抗CD3抗体刺激后,提取总RNA,通过RT-PCR获得两个部分重叠的IL-21 cDNA片段(分别为5′端242 bp,3′端425 bp),重组PCR扩增出IL-21全长cDNA.DNA测序正确后,将成熟IL-21 cDNA的编码框序列构建到原核表达载体pET28a(+)中.卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆菌进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE、Western blotting鉴定,亲和层析分离纯化得到Mr为18 600的带有组氨酸标签重组人IL-21融合蛋白.透析法重折叠复性,MTY法测定其对T细胞增殖活性.结果:成功获得人IL-21全长cDNA,并以包涵体形式表达于大肠杆菌中.重折叠后的rhIL-21融合蛋白具有与抗CD3抗体共刺激T细胞增殖作用.结论:获得具有生物学活性的rhIL-21细胞因子,为进一步研究其功能奠定基础.
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