期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达
温伟红；赵晶；于翠娟；许彦鸣；金明；王成济；杨安钢
关键词：单链抗体, 表达, 乙型肝炎, HBsAg
摘要：目的:构建抗人HBsAg单链抗体基因,并分析其在COS-7细胞中的表达.方法:以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板,分别扩增其轻、重链可变区(VL、VH)基因,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly 4Ser)3的编码序列连接,并引入前导肽编码序列,构建具有L-VH-Linker-VL结构的单链抗体基因.将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体pEGFP-N3,并转染COS-7细胞进行表达.结果:经测序表明,前导肽、连接肽、VL 及VH的序列正确.酶切鉴定证实,成功地构建了GFP基因融合表达载体.瞬时转染COS-7细胞后,通过荧光显微镜观察证实有ScFv融合蛋白的表达.转染细胞的培养上清浓缩后,进行 SDS-PAGE及Western blot 分析,可检出ScFv融合蛋白的分泌性表达.培养上清的间接ELISA 检测证实,所表达的单链抗体具有与HBsAg结合的特异性.结论:成功地构建了抗人HBsAg 单链抗体基因,并可在COS-7细胞中分泌性表达.
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