期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
TGF-βRⅡ/Fc融合蛋白的纯化及其生物学活性鉴定
李圣青；李焕章；杨乔欣；倪殿涛
关键词：转化生长因子-β, 肺间质纤维化, 融合蛋白
摘要：目的: 用重组Bac-TRⅡ杆状病毒表达系统大量表达融合蛋白TGF-βRⅡ/Fc, 并对其进行纯化及鉴定; 验证该融合蛋白是否能够阻断细胞因子TGF-β1的生物学作用.方法: 采用病毒空斑形成试验测定病毒滴度, 并对其进行扩增.采用Protein G 柱和快速蛋白质液相层析法(FPLC)纯化目的蛋白.采用SDS-PAGE分析纯化后的目的蛋白, 并将蛋白电泳条带进行灰度扫描, 计算目的蛋白的含量.采用Western blot和夹心ELISA法, 鉴定目的蛋白是否表达.采用MTT比色法, 验证融合蛋白TGF-βRⅡ/Fc能否阻断TGF-β1对小鼠肺成纤维细胞(L929)生长的作用.采用Western blot技术, 验证融合蛋白能否阻断TGF-β1对L929细胞纤维黏连蛋白(FN)生成的促进作用.结果: 本实验室构建并保存的重组Bac-TRⅡ杆状病毒原液内病毒的滴度为2×1012 pfu/L.蛋白电泳后灰度扫描结果表明, 目的蛋白约占总蛋白的10%.夹心ELISA法和Western blot分析证明目的蛋白已表达.融合蛋白TGF-βRⅡ/Fc能够阻断TGF-β1对L929细胞生长的抑制作用, 以及对该细胞FN生成的促进作用.结论: 本室构建的重组Bac-TRⅡ杆状病毒表达系统, 能够表达融合蛋白TGF-βRⅡ/Fc, 表达水平为9 mg/L.纯化得到的目的蛋白具有一定的生物学活性, 可阻断TGF-β1对L929细胞生长的抑制作用和对FN生成的促进作用, 为该蛋白的成批生产及在肺间质纤维化基因治疗中的应用奠定了基础.
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