期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
稳定表达p27蛋白的肝细胞癌细胞株的建立与鉴定
骆文静；王文亮；任东青；陈景元；王枫；陈耀明
关键词：p27, 肝细胞肝癌, 转染, 基因表达
摘要：目的探讨细胞周期抑制蛋白p27在肝癌细胞凋亡过程中的调节功能及其作用机制,建立稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株.方法提取含有人p27基因的真核细胞表达载体pcDNA3-p27,用限制性内切酶EcoR Ⅰ和NotⅠ酶切后,经琼脂糖凝胶电泳鉴定.用脂质体介导的基因转染法,分别将真核细胞表达载体pcDNA3-p27和pcDNA3导入不表达p27蛋白的人肝癌细胞系HHCC细胞中,通过G418筛选获得转入目的基因的阳性细胞克隆.用免疫组织化学染色法和Western blot检测p27蛋白的表达,经多次用有限稀释法连续克隆化,直至获得100%稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株. 结果琼脂糖凝胶电泳表明,可见597 bp的p27基因片段.免疫细胞化学染色和Western blot检测表明,转染pcDNA3-p27的HHCC细胞大部分有p27蛋白的表达;而转染空载体pcDNA3或未转染的HHCC细胞,均未见p27蛋白表达.经连续3次克隆化后,转染pcDNA3-p27的HHCC细胞100%表达p27蛋白.结论成功地获得了稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株,命名为HCC-p27.
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