期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
应用基因工程方法制备新型重组人肿瘤坏死因子-α
张英起；赵宁；李波；刘磊；王增禄；朱宝娥；颜真；苏成芝
关键词：重组人肿瘤坏死因子-α, 基因表达, 大肠杆菌
摘要：目的应用基因工程技术,制备一种新型的重组人肿瘤坏死因子-α(novel recombinant human tumor necrosis factor-α,nrhTNF-α),并对其生物学活性、理化性质进行鉴定,为进入临床前研究提供基础.方法应用PCR技术,将hTNF-α基因的5′端1～7个氨基酸的编码序列删除,基因中Pro8Ser9Asp10的编码序列用Arg-Lys-Arg的编码序列取代,同时Leu157的密码子被Phe的密码子所取代.将hTNF-α突变基因,插入原核高效表达载体pBV220中,构建高表达工程菌株.纯化表达产物,对连续3批制备的新型rhTNF-α,按人用<重组DNA制品质量控制要点>检定要求进行鉴定.结果DNA序列分析和蛋白质N末端、C末端部分氨基酸序列分析表明,nrhTNF-α与天然的hTNF-α相比较,N末端缺失了7个氨基酸,1～3位氨基酸为Arg-Lys-Arg,其后为天然hTNF-α 11位以后的氨基酸.157位Leu的密码子被Phe的密码子所取代.产物表达量占菌体蛋白的67.4%.经(NH4)2SO4沉淀、Q-Sepharose F.F.及S-Sepharose F.F.柱层析分离纯化后,产品的纯度达99%,比活性达1×109IU/mg蛋白.结论成功地制备了nrhTNF,对连续3批制备的nrhTNF-α按人用<重组DNA制品质量控制要点>检定要求进行鉴定,所有项目均合格.
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