期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3的构建及在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达
邓志宏；王锦玲；邱建华；金明；高下；王成济；杨安纲
关键词：NT-3, 基因克隆, 真核表达载体, 成纤维细胞
摘要：目的构建真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3, 并观察其在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达及分布.方法用RT-PCR法, 从人肝脏组织中克隆NT3-cDNA基因, 构建真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3, 并经PCR及EcoR I/BamH I双酶切鉴定.用脂质体介导的方法, 将用真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞. 转染48 h后,分别在荧光显微镜下及用免疫组化法观察转染细胞中NT-3的表达.结果人NT-3 cDNA的PCR产物约为744 bp.序列测定结果用BLAST软件进行同源性比较, 同源性为100%.经EcoR I/BamH I双酶切证实, NT-3 cDNA已成功地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中.用脂质体介导法,将pIRES2-EGFP-NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞, 在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的成纤维细胞. NT-3免疫组化染色结果显示,转染NT-3基因的成纤维细胞胞浆呈棕黄色着色; 而转染空载体的成纤维细胞免疫组化染色呈阴性.结论成功地构建真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3, 并在豚鼠耳蜗原代成纤维细胞中表达, 为NT-3基因转染治疗致聋豚鼠耳蜗动物试验奠定了基础.
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