期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
VEGF165 cDNA在酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究
马骊；王小宁；张智清；陈爱君；姚立红；姜忠良
关键词：血管内皮生长因子, 毕赤巴斯德酵母, 表达
摘要：目的研究人 VEGF165基因在 Pichia pastoris酵母中的表达，获得高效表达、具有生物学活性的重组 hVEGF165。方法采用 PCR扩增 hVEGF165基因，经 DNA序列分析后，插入含 AOX1 启动子和α分泌信号肽序列的 Pichia pastoris酵母表达载体中，构建重组质粒 pPIC9K/hVEGF165。经转化酵母宿主菌 KM71，筛选多拷贝整合转化子，摇瓶培养，用 10 mL/L甲醇诱导表达。表达产物经 Heparin-Sepharose CL6B亲和层析纯化后，以人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)测定其生物学活性。结果 SDS-PAGE分析显示，表达产物以可溶性分子的形式存在于上清中，诱导 4 d的表达量达上清中总蛋白的 60％以上。 Western blot表明，表达产物具有良好的抗原性和特异性。经 Heparin-Sepharose CL6B亲和层析纯化， rhVEGF165的纯度可达到 90％以上。生物学活性检测证实，其具有刺激脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖的活性。结论在 Pichia pastoris表达系统中，实现了 hVEGF165的高效分泌性表达。
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