期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第四军医大学共同主办，为国内外公开发行的国家级科技期刊，属于全国中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊及美国《CA》刊源。
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首页>细胞与分子免疫学杂志
- 杂志名称：细胞与分子免疫学杂志
- 主管单位：中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位：陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 国际刊号：1007-8738
- 国内刊号：61-1304/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全军优秀编辑奖（96）期刊收录：CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏
链球菌蛋白G快速纯化人源生物工程抗体
韩焕兴；黄忠文；王永奎；陆慧琦；叶伟民；罗荣城
关键词：人源基因工程抗体, 亲和层析, 链球菌蛋白G
摘要：目的根据链球菌蛋白G与人抗体的Fab片段有弱结合位点的特征,探索应用蛋白G亲合纯化原核表达的人源mAb片段的可行性,为人源基因工程抗体的批量制备提供依据.方法扩增抗HBs+菌株,经IPTG诱导表达后制备表达产物上清,与商品化链球菌蛋白G亲合胶(GammaBind)反应,PBS洗去非特异结合蛋白,梯度酸洗脱结合UV检测观察解离效果,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检验纯化产物的纯度,Dot Blot鉴定亲合纯化后Fab的抗原反应性,并与抗Fab抗体亲合纯化法进行比较.结果在酸洗脱的早期(pH4.5)即有特异蛋白解离,峰值在pH3.54.0之间,纯化后的抗体片段在PAGE中形成单一区带,达到电泳纯;酶标抗Fab抗体免疫印迹结果证明,电泳显示的单一区带确为Fab蛋白区带;抗原特异Dot blot检测表明,该法制备出的Fab保持了抗原结合活性,且在得率和活性方面优于抗-Fab抗体法.结论本实验采用的一步亲合纯化法具有操作简便、纯化快速和高效的特点,是人源性mAb Fab片段纯化的较佳方法.
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